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肿瘤坏死因子-α对大鼠肺泡上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的影响
TNF-α damages rat lung epithelial cells and affects the expression of tight junction proteins Claudin-4 and ZO-1.
作者:石国翠,马申懋,马希刚    发布日期:2019-09-03    

目 的 探究肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar
epithelial type Ⅱ cells, AEC- Ⅱ)及紧密连接蛋白 ZO-1、Claudin-4 表达的影响。 方法 体外培养
大鼠 AEC- Ⅱ细胞,将细胞分为正常对照组,TNF-α24 h、48 h、72 h 组。对照组用含胎牛血清的
DME F12 培养液培养细胞,TNF-α 各组用 TNF-α(10 ng/mL)分别刺激细胞 24、48、72 h。共
培养结束后采用透射电镜鉴定并观察细胞超微结构的变化。MTT 法测定细胞增殖抑制情况。流
式细胞仪测定细胞早期凋亡率。免疫荧光法观察各组细胞紧密连接蛋白 ZO-1、Claudin-4 表达分
布,实时荧光定量 PCR 法测定各组细胞 ZO-1、Claudin-4 mRNA 水平的变化,Western blot 测定紧
密连接蛋白 ZO-1、Claudin-4 表达的变化。多组样本间均数比较采用单因素方差分析,组间两两
比较采用 SNK-q 检验。方差不齐时则用秩转换的非参数检验。以 P<0.05 为差异有统计学意义。
结果 透射电镜下可见对照组大鼠 AEC- Ⅱ细胞内含有大小不等的特征性板层小体,TNF-α 各组
板层小体逐渐排空,视野下可见凋亡细胞。TNF-α 各组细胞的早期凋亡率及增殖抑制率均较对
照组降低(均 P<0.05)。共聚焦显微镜下观察到 ZO-1 沿细胞膜呈线状分布,Claudin-4 沿细胞膜
呈散点状分布,TNF-α 各组 ZO-1 的荧光强度减弱,连续性被破坏,线性结构断裂,甚至消失。
Claudin-4 的荧光强度减弱,密度降低。TNF-α24 h 组 ZO-1 的转录及表达均低于对照组,但差异
无统计学意义(P>0.05)。TNF-α48 h 及 72 h 组细胞 ZO-1 的 mRNA(0.28±0.06 ;0.13±0.07)与
对照组比较明显降低(P<0.01),且两组蛋白水平(0.44±0.09;0.2±0.01)均低于对照组(0.69±0.12)。
与对照组比较,TNF-α 各组细胞 Claudin-4 转录(24 h:0.16±0.03,48 h:0.04±0.01,72 h:0.01±0.00
vs 1.00±0.00)及表达水平(24 h :0.49±0.08,48 h :0.34±0.05,72 h :0.04±0.01 vs 0.96±0.13)
明显降低(均 P<0.05),且随着时间延长呈递减趋势。结论 TNF-α 通过损伤大鼠 AEC- Ⅱ和下
调细胞紧密连接蛋白 ZO-1、Claudin-4 的表达分布,损伤肺上皮屏障。

石国翠,马申懋,马希刚. 肿瘤坏死因子-α对大鼠肺泡上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2019,28(9): 1093-1099.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2019.09.007