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多药耐药相关蛋白4对脂多糖诱导的内皮细胞通透性及细胞骨架的影响
Effects of MRP4 gene on lipopolysaccharide-induced endothelial permeability and the cytoskeleton of endothelial cells
作者:夏文芳,郑颜磊,周青山,苏镔,张桓铭    发布日期:2017-08-31    

目的探讨多药耐药相关蛋白4(MRP4)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)通透性及细胞骨架的影响。方法PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组,对照组(细胞不做任何处理)、LPS组(细胞仅接受LPS刺激)、shMRP4重组腺病毒组(Ad-shMRP4,将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上,通过腺病毒感染细胞+LPS刺激)、shRNA重组腺病毒组(Ad-shRNA,带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞+LPS刺激)。通过荧光显微镜观察细胞感染率,Western botting 检测MRP4的表达水平,Transwell小室法检测单层细胞通透性,激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况。多组间差异采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果与对照组比较,LPS组及Ad-shRNA组MRP4的表达水平显著上调(P<0.05)、单层细胞通透性显著增加(2、6、12、24 h分别为:0.28±0.02和0.41±0.04、0.32±0.02;0.30±0.01和0.53±0.04、0.39±0.03;0.33±0.04和1.12±0.17、0.70±0.07;0.32±0.03和0.79±0.02、0.57±0.05,P<0.05),F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成。与LPS组比较,Ad-shMRP4组MRP4的表达水平明显下调(P<0.05)、单层细胞通透性明显降低(2、6、12、24 h分别为:0.41±0.04 和0.32±0.02;0.53±0.04和0.39±0.03;1.12±0.17和0.70±0.07;0.79±0.02和0.57±0.05,P<0.05),F-actin重构以及应力纤维形成显著减少。结论MRP4基因沉默显著增减轻LPS诱导的内皮细胞通透性增高及细胞骨架破坏,对内皮细胞屏障发挥保护作用。

夏文芳,郑颜磊,周青山,苏镔,张桓铭. 多药耐药相关蛋白4对脂多糖诱导的内皮细胞通透性及细胞骨架的影响[J]. 中华急诊医学杂志, ,: 1032-1036.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2017.09.011