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组蛋白去乙酰化酶2调节Nrf2乙酰化水平在脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制
Antioxidant mechanism of HDAC2 regulating Nrf2 acetylation in LPS-induced type II alveolar epithelial cell injury
作者:陈隆望,罗以楠,蔡文超,李萌芳,连洁,赵光举,洪广亮,卢中秋,邱俏檬    发布日期:2019-03-07    

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylases,HDAC2)调节核因子E2 相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)乙酰化水平在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制。方法 常规培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,用不同浓度的LPS(10、100、1 000 ng/mL)刺激,分别在0、6、12、24 及48 h 时用CCK-8 检测细胞活性,选择合适的浓度和时间点。常规培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,随机分为对照组、LPS组、HDAC2 慢病毒干扰组(siRNA-HDAC2组)和HDAC2 慢病毒过表达组(LV-HDAC2组)。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HDAC2 和Nrf2 蛋白表达水平,免疫共沉淀法检测 Nrf2 乙酰化水平,放线菌酮作用后检测Nrf2 稳定性。化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性。采用 SPSS 23.0 统计软件,多组间比较采用单因素方差分析检验,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果 与对照组相比,LPS组HDAC2的蛋白表达水平升高(t=5.974,P=0.027),Nrf2 乙酰化水平降低(t=7.223,P=0.002),Nrf2 蛋白水平升高(t=2.929,P=0.043),Nrf2的蛋白稳定性升高,SOD 活性下降(t=121,P<0.01),MDA 含量升高(t=10.45,P=0.000 5)。与LPS组相比,过表达HDAC2 后Nrf2 乙酰化水平降低(t=11.29,P=0.000 4),Nrf2 蛋白表达水平升高明显(t=3.194,P=0.033),Nrf2的蛋白稳定性升高,SOD 活性升高(t=4.678,P=0.009),MDA 含量下降(t=5.417,P=0.005 6),而下调HDAC2后呈现相反的趋势。结论 LPS刺激后Ⅱ型肺泡上皮细胞氧化应激加重,HDAC2 可降低Nrf2 乙酰化水平,提高Nrf2 蛋白表达,减轻LPS 引起的氧化应激。

陈隆望,罗以楠,蔡文超,李萌芳,连洁,赵光举,洪广亮,卢中秋,邱俏檬. 组蛋白去乙酰化酶2调节Nrf2乙酰化水平在脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制[J]. 中华急诊医学杂志, 2019,28(3): 328-334.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2019.03.011