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乌司他丁通过miR-21/p38MAPK 通路对脓毒症保护作用的研究
To investigate the effect of miR-21-mediated P38MAPK signaling pathway on macrophage inflammatory response and the intervention of ulinastatin
作者:陶杨 肖玲 黄健 马渝    发布日期:2018-11-06    

目的 探讨乌司他丁对脓毒症中miR-21/p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路影响。方法 将SPF 级BALB/c小鼠(30 只)随机(随机数字法)分为3组(每组n=10):脓毒症组(LPS组,LPS 10 mg/kg 一次性腹腔内注射),乌司他丁预处理组(UTI组,乌司他丁105 U/kg 腹腔注射预处理2 h后给予LPS 10 mg/kg 腹腔内注射),正常组(相同时间点注射等体积生理盐水)。24 h后处死小鼠观测肺组织病理学结果,采用荧光实时定量PCR 法测定肺组织中miR-21 表达,免疫组化法检测各组肺部组织中PTEN,p-p38MAPK 的表达。另外,小鼠巨噬细胞RAW264.7 细胞采用LipofectamineTM 2000 转染试剂以及miR-21 模拟剂(100 nmol/L)、抑制剂(100nmol/L) 处理 6 h后,弃掉上清液,加入乌司他丁(1 000 U/mL) 处理2 h后加入LPS(500 ng/ mL) 刺激,培养24 h后收集细胞,应用PCR 法测定肺组织中miR-21 表达,Western-blot 法分别检测PTEN、p-p38MAPK 蛋白表达情况。结果 动物实验中,与正常组(1.00±0.00) 比较,LPS组中miR-21(2.73±0.17) 及p-p38MAPK 表达上调,miR-21 下游靶基因PTEN 蛋白表达下调, 而与LPS组比较,UTI组miR-21(2.14±0.13) 及p-p38MAPK 表达水平下降,PTEN 蛋白表达上调(P<0.05)。细胞实验中, 与LPS组(1.93±0.21)比较,LPS+miR-21 抑制剂组p-p38MAPK 蛋白表达量(1.51±0.06)下降,而LPS+miR-21 模拟剂组p-p38MAPK 蛋白表达量(2.52±0.07)升高(P<0.05)。而加入UTI 干预后,结果显示LPS+UTI组p-p38MAPK 蛋白表达量(0.61±0.04)比LPS组低;而与LPS+UTI组(0.61±0.04)比较,LPS+UTI+miR-21 抑制剂组p-p38MAPK 蛋白表达(2.36±0.15) 升高,LPS+UTI+miR-21模拟剂组p-p38MAPK 蛋白表达(0.22±0.05) 下降(P<0.05)。结论 乌司他丁在脓毒症中发挥保护作用,其机制与调控miR-21/p38MAPK通路有关。

陶杨 肖玲 黄健 马渝. 乌司他丁通过miR-21/p38MAPK 通路对脓毒症保护作用的研究[J]. 中华急诊医学杂志, ,: 1242-1247.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2018.11.012