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沉默信息调节因子1 在脂多糖诱导胰岛素瘤细胞-1 线粒体损伤中的作用
Role of SIRT1 in lipopolysacchride - induced mitochondrial injury in INS-1 cells
作者:莫兴兴 王晓 葛勤敏 边帆    发布日期:2018-11-06    

目的 探讨沉默信息调节因子(silent mating type information regulation 2 homolog1,SIRT1)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导胰岛素瘤细胞-1(insulinoma cell lines-1, INS-1)细胞线粒体损伤中的作用。方法 将对数生长期的INS-1 细胞分为5组:正常对照组、1 mg/L LPS组(LPS 干预细胞24 h)、白藜芦醇(resveratrol,RSV)+LPS组(10 μmol/L RSV 预处理1 h 后,加入1 mg/L LPS 干预24 h)、EX527+LPS组(20 μmol/L EX527 预处理1 h 后,加入1 mg/L LPS干预24 h)、EX527+RSV+LPS组(20 μmol/L EX527 预处理1 h 后,加入10 μmol/L 的RSV 和1mg/L LPS 干预24 h)。检测细胞活力和ATP 生成;提取INS-1 细胞总蛋白、胞质蛋白和线粒体蛋白,Western-blot 法检测SIRT1、TLR4、乙酰化FoxO1、细胞色素C(cytochrome C,CytC)、线粒体融合蛋白1(mitofusion1,Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusion2,Mfn2)、线粒体分离蛋白1(fission1,Fis1)蛋白的表达; Real-time PCR 方法检测SIRT1、FoxO1、Mfn1、Mfn2、Fis1 基因水平的变化。多组间比较采用单因素方差分析,用LSD-t 法进行组间两两比较。结果 1 mg/L LPS 作用于INS-1细胞24 h后,细胞活力降低(n=4,F=13.98,P<0.01),ATP 生成减少(n=4,F=27.92,P<0.05),RSV 预处理后促进ATP 生成(P<0.01),但不能逆转EX527 预处理后ATP 生成的降低(P>0.05)。RSV 可以促进SIRT1、Mfn1、Mfn2 蛋白表达和基因上调,降低TLR4 和Fis1 蛋白表达,下调其基因水平,减少CytC 在细胞质中的释放(P<0.01),而各组间FoxO1 蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 白藜芦醇可能通过改变SIRT1的活性,调控FoxO1 的乙酰化,部分参与调节LPS 诱导的INS-1 细胞线粒体的损伤。

莫兴兴 王晓 葛勤敏 边帆. 沉默信息调节因子1 在脂多糖诱导胰岛素瘤细胞-1 线粒体损伤中的作用[J]. 中华急诊医学杂志, ,: 1224-1231.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2018.11.009