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The effects of miR-10a on the immune function of splenic CD4 + CD25 + Treg cells in septic mice
作者：陈隆望,邱俏檬,连洁,李海啸,洪广亮,卢中秋,赵光举 发布日期：2018-02-02
目的 探讨脓毒症小鼠CD4+CD25+Treg（regulatory cell）细胞中microRNA-10a（miR-10a）表达规律及与细胞免疫功能的关系。方法 采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture，CLP）模型，分别于术后1、3、5、7 d处死小鼠，无菌留取脾脏，免疫磁珠法分选CD4+T细胞与CD4+CD25+T细胞（CD4+CD25+Treg）。流式细胞术检测CD4+CD25+Treg胞内叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3（Forkhead/winged helix transcription factor p3，Foxp3），CCK-8法检测脾效应T淋巴细胞增殖，实时定量PCR（Real-time PCR）检测Treg中miR-10a的基因表达水平。小鼠尾静脉注射慢病毒下调miR-10a，观察小鼠免疫功能。数据采用SPSS 19.0统计软件进行数据处理，两组样本比较采用独立样本t检验，多组均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)和Dunnett-t检验。结果 正常组小鼠CD4+CD25+Treg细胞在CD4+T细胞中的比例为（7.34±1.2）%，造模后脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg比例1、3、5、7 d明显升高（P < 0.05）。与假手术组相比，脓毒症小鼠Foxp3的平均荧光强度（mean fluorescence intensity，MFI）也明显高于假手术组（P < 0.05）。Real-time PCR检测CD4+CD25+Treg中miR-10a的表达。结果发现假手术组小鼠与正常组小鼠相比差异无统计学意义（P > 0.05）。脓毒症小鼠Treg中miR-10a表达较假手术组升高（P < 0.05）。脓毒症鼠尾静脉注射携带miR-10a抑制序列的慢病毒后，CD4+CD25+Treg/CD4+T比例明显升高（P < 0.05），且Foxp3的平均荧光强度也明显增强（P < 0.05），CD4+T细胞的增殖能力相应减弱（P < 0.05）。结论 在脓毒症致病过程Treg中miR-10a表达上调，抑制miR-10a水平能够显著提高Treg的比例和促进免疫抑制功能。鉴于CD4+CD25+Treg在脓毒症免疫功能紊乱中的重要作用，miR-10a可能是脓毒症免疫调理治疗的有效靶点。
陈隆望,邱俏檬,连洁,李海啸,洪广亮,卢中秋,赵光举. miR-10a对脓毒症小鼠脾脏CD4+CD25+Treg免疫功能影响的实验研究[J]. 中华急诊医学杂志, 2018,27(2): 152-158.DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2018.02.009
基金项目：国家自然科学基金（81401621；81571937）；浙江省自然科学基金（LY13H150004；LY13H150006；LY15H150006）；浙江省中医药优秀青年人才基金（2013ZQ023）；温州市科技计划项目（Y20150033）
关键词： 调节性T细胞 脓毒症 microRNA-10a 叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3 免疫功能
