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The mechanism of PI3K/AKt/GSK3β signaling pathway on the brain protective effect of neck cooling during resuscitation
作者：张浙,肖盐,刁孟元,管军,杨兴易,林兆奋 发布日期：2017-05-02
目的：研究PI3K/Akt/GSK3β信号通路在颈部降温的调节作用，初步探讨颈部降温的脑保护作用是否与PI3K/Akt及GSK3β的磷酸化有关。方法：实验在第二军医大学附属长征医院急救科实验室完成。健康雄性新西兰家兔30只随机（随机数字法）分为5组，采用4 min室颤模型。（1）假手术组：常规手术操作置管，不诱导CA，于术后24 h处死取标本。（2）常温复苏组（normothermia theat，NT组）：常规致颤复苏并于24 h时间点处死动物取标本。（3）复苏即刻降温组（intra-arrest therapeutic hypothermia，IATH组）：于心肺复苏同时启动颈部快速降温，目标脑温为34 ℃，以后维持目标脑温至ROSC后4 h。于24 h时间点处死动物取标本。（4）复苏中降温+特异性抑制剂LY294002（LY294002组）：复苏前20 min脑室注射LY294002，其余同组3。（5）复苏后1 h降温组（post-arrest therapeutic hypothermia，PATH组），于心肺复苏后1 h启动颈部快速降温，目标脑温为34 ℃，其余同组3。LY294002溶于DMSO稀释成10 μmol/L，在动物脑立体定位仪下在ROSC前20 min前给予脑室内注射，其余各组给予溶剂DMSO。动物24 h过量麻醉处死，采集标本。应用Western blot检测Akt、p-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β (ser9)的蛋白表达，运用TUNEL等方法观察各组组织凋亡变化。所得数据以均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析。结果：与Sham组比较，常温心肺复苏组兔脑细胞胞质中的Akt (Thr-308)磷酸化水平（P-AKT）和P-GSK3β在心肺复苏后24 h明显减低(P<0.05)； 复苏即刻颈部降温组P-AKT和P-GSK3β水平在心肺复苏后24 h均较常温复苏组明显增强(P<0.05)；复苏后1 h降温组的蛋白表达水平在复苏后24 h也较常温复苏组有增强(P<0.05)，但弱于复苏即刻颈部降温组；脑室内注射LY294002去除了亚低温的这一作用，表明了LY294002抑制Akt的磷酸化。复苏即刻降温组和复苏后1 h降温组的凋亡细胞较常规复苏组和LY294002组明显减少(P<0.05)。结论：颈部降温能减轻复苏后兔脑神经细胞的损伤，复苏时即刻降温能有更好的脑保护作用。低温的脑保护作用能够被PI3K/Akt通路的阻断剂所阻断。说明亚低温的脑保护作用是通过PI3K/Akt通路的激活来实现的。颈部降温可通过PI3K/Akt/GSK-3β信号通路，使蛋白激酶B的活化，促进GSK3β的磷酸化,发挥神经保护作用。PI3K/Akt通路阻断剂LY294002可抑制复苏后脑组织Akt的活化，从而抑制了下游GSK3β的磷酸化,抵消降温的神经保护作用。
张浙,肖盐,刁孟元,管军,杨兴易,林兆奋. PI3K/AKt/GSK3β信号通路在复苏中颈部降温的脑保护作用机制[J]. 中华急诊医学杂志, ,: 554-559.DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2017.05.014
基金项目：国家自然科学基金
关键词： 心搏骤停 心肺复苏 低温 PI3K/Akt/GSK3β
