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HSP70沉默对缺氧状态下SH-SY5Y细胞系影响的研究
Effect of HSP70 gene silence on SH-SY5Y induced by hypoxia
作者:谢春雨 谢伟峰 李庆淑 王芸 宋砚坤 张楠 胡丹 曲彦    发布日期:2017-02-07    

目的 采用RNA干涉技术沉默SH-SY5Y细胞系HSP70的表达,观察HSP70沉默对缺氧神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡及BAG-1、Caspase-3、NF-κB表达的影响。方法Western blotting检测缺氧处理后HSP70蛋白表达水平,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HSP70 mRNA转录水平;细胞缺氧4h、8h、12h后再复氧24h,CCK8法检测细胞生长与增殖情况。选择8h缺氧时间,流式细胞仪检测分析细胞凋亡;qRT-PCR检测BAG-1 mRNA转录水平;Western blotting检测BAG-1、Caspase-3、NF-κB蛋白表达水平。结果①重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组和重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组HSP70 mRNA和蛋白转录表达水平均分别低于细胞对照组和慢病毒对照组,差异均有统计学意义(P‹0.05)。②随缺氧时间延长,4组细胞细胞活性均呈先升高后降低趋势,且均在缺氧8h时达高峰。缺氧8h时,重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组细胞活性均低于细胞对照组及慢病毒对照组(P‹0.05).③重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组与细胞对照组和慢病毒对照组相比,细胞凋亡均显著升高(P‹0.05)。④重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组与细胞对照组和慢病毒对照组相比,BAG-1 mRNA和蛋白转录表达水平均无显著差异(P>0.05);Caspase-3和NF-κB蛋白表达水平则显著升高(P<0.05)。结论 HSP70沉默可增加SH-SY5Y细胞对缺氧耐受的敏感性,其机制可能是通过上调Caspase-3及NF-κB表达促进细胞凋亡实现。

谢春雨 谢伟峰 李庆淑 王芸 宋砚坤 张楠 胡丹 曲彦. HSP70沉默对缺氧状态下SH-SY5Y细胞系影响的研究[J]. 中华急诊医学杂志, ,: 191-193.
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