自噬在心肺复苏后脑损伤中的作用 The effects of activation of Autophagy on the neuron injury after return of spontaneous circulation from ventricular fibrillation in Wistar rats
作者:曾小云,熊海霞,李欣,夏金明,魏红艳,廖晓星,胡春林,荆小莉 发布日期:2013-12-02
目的 观察自噬(autophagy)在心肺复苏(CPR)后Wistar大鼠脑损伤中的作用。 方法 实验一:36只健康成年雄性Wistar大鼠通过体外交流电刺激诱发心室颤动(VF),VF(0)前和ROSC后1、2、4、8、12 h取大脑皮层观察beclin-1 和LC3Ⅱ的表达。实验二:60只Wistar大鼠随机(随机数字法)分为对照组(control)、自噬激活剂雷帕霉素组(Rapamycine)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA)。VF前1 h分别向腹腔内注入生理盐水或雷帕霉素1 mg/kg或3-甲基腺嘌呤30 mg/kg。ROSC后2、4 h取大脑皮层,用电镜和Western blot方法观察神经元自噬的激活,免疫荧光观察LC3 颗粒的形成;24、48、72 h进行NDS评分;72 h后取大脑皮层行HE染色和TUNEL染色计数顶叶皮层存活神经元细胞数和凋亡神经元细胞数。beclin-1、LC3Ⅱ 表达和神经元计数用单因素方差分析,NDS比较用秩合检验。 结果 实验一中28只Wistar大鼠复苏成功。ROSC后2、4 h自噬基因beclin-1和LC3Ⅱ的表达明显低于VF前(P<0.05),而ROSC后8、12 h的表达与VF前差异无统计学意义。Rapamycine组动物ROSC后2、4 h大脑皮层beclin-1的表达和LC3Ⅱ的转换明显高于Control组和3-MA组,P<0.05。ROSC后2、4 h Rapamycine组自噬泡数量明显多于Control组和3-MA组;ROSC后4 h Rapamycine组LC3颗粒数也明显多于Control组和3-MA组。ROSC后72 h Rapamycine 组动物大脑皮层存活的神经元细胞数多于Control 组和3-MA组(P<0.05);凋亡神经元细胞数 Rapamycine 组少于Control组和3-MA组(P<0.05)。ROSC后24、48、72 h Rapamycine 组的NDS 评分优于control组和3-MA组(P<0.05)。 结论 ROSC后早期大脑皮层神经元beclin-1和LC3-Ⅱ表达下降,通过雷帕霉素促进beclin-1和LC3-Ⅱ表达可以保护神经元细胞和改善神经功能。