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目的 探讨microRNA-29a(miR-29a)对人单核细胞株THP-1凋亡的作用及其机制。方法 体外培养人单核细胞株THP-1和人胚肾细胞株293T,合成人miR-29a的拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor)。用脂质体Lipofectamine RNAiMAX转染miR-29a的mimic或inhibitor进入THP-1细胞,分组处理后收集细胞标本。第一组细胞转染mimic (100nM) 48h;第二组细胞先转染 inhibitor (100nM) 24h,再用LPS 诱导24h,分别用流式细胞仪方法检测两组细胞凋亡,用real-time RT-PCR 方法检测抗凋亡基因 Bcl-2和Mcl-1 的表达变化。构建Bcl-2 和Mcl-1 的荧光素酶报告基因载体,用脂质体 Lipofectamine 2000 转染293T 细胞(DNA 质粒和miRNA 片段共转染),双荧光素酶报告基因系统(luciferase)检测荧光素酶的表达变化。结果 THP-1细胞转染miR-29a 的mimic 48h后,细胞凋亡较对照组增加;单独用LPS 诱导THP-1 细胞,24h 后细胞凋亡较对照组增加;THP-1 细胞先转染inhibitor24h 后,再用LPS诱导24h,细胞凋亡较单独用LPS诱导组减少;THP-1细胞转染miR-29a的mimic后,抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1的表达水平降低明显(P<0.05)。另外,Luciferase 检测结果显示,在293T细胞中,双萤光报告系统显示 miR-29a可特异抑制带有 Bcl-2 和Mcl-1 3’UTR上野生型识别元件的报告基因表达(P<0.05)。结论 上调miR-29a的表达水平能促进THP-1细胞发生凋亡,下调miR-29a的表达水平则能抑制LPS诱导的THP-1细胞凋亡,miR-29a调控THP-1的凋亡水平是通过靶向于两个抗凋亡基因Bcl-2和Mcl-1实现的,提示miR-29a在调控免疫细胞的凋亡过程中具有重要的作用。
熊旭明,张振辉,江子欣,陈伟燕,杨其霖,刘卫江. MicroRNA-29a在脂多糖诱导人单核细胞凋亡中的作用和机制[J]. 中华急诊医学杂志, 2013,22(1): 40-45.