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【摘要】 目的 探究盲肠结扎穿孔法建立的脓毒症小鼠模型肝细胞自噬的发生情况及不同时间点自噬相关蛋白和炎症因子的表达规律。 方法 50只6-8周龄清洁级雄性ICR小鼠按照随机数字表法平均分为5组:CLP 3h组,CLP 6h组,CLP 12h组,CLP 24h组和对照组,于术后相应时间点取材。生化法检测肝功能ALT和AST;ELISA法检测血清炎症因子IL-6和TNF-α的表达量;HE染色观察肝组织炎症情况;电镜观察肝组织自噬体、自噬溶酶体的超微结构;免疫印迹法检测肝组织自噬蛋白LC3和P62的表达量;免疫荧光观察肝组织冰冻切片自噬体的位置和数量。 结果 CLP术后ALT和AST明显升高,分别在6h和3h到达高峰;IL-6的表达量在24h内先升高后降低后又升高,TNF-α在24h内持续降低;HE染色观察肝库普弗细胞活化,单个粒细胞浸润;电镜观察到肝细胞线粒体肿胀、自噬体,自噬溶酶体形成;免疫印迹法显示自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ比值在24h内先升高后降低,6h达到高峰;P62蛋白在24h内先降低后升高,在6h达到最低;免疫荧光结果显示指示自噬蛋白LC3含量的荧光斑点于6h达到数量高峰。以上结果各时间点组和对照组相比差别均具有统计学意义(P<0.05)。 结论 盲肠结扎穿孔法建立脓毒症小鼠模型肝脏发生了自噬现象,且自噬先增强后减弱,自噬体形成在6h达高峰。
沈美佳,张国强,孙力超. 脓毒症小鼠肝细胞自噬与LC3/P62表达的实验研究[J]. 中华急诊医学杂志, 2019,28(4): 467-472.