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普通肝素对高迁移率族B1 介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5 下调的保护作用
Protective effect of unfractionated heparin on HMGB1-mediated down-regulation of endothelial Claudin-5
作者:吴蕾,栾正刚    发布日期:2018-11-06    

目的 研究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein, HMGB1) 对人脐静脉内皮细胞屏障通透性的影响,以及普通肝素对HMGB1 介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5 下调的保护作用。方法 将经胰酶消化后的人脐静脉内皮细胞于培养瓶中传代培养,并分成4组:空白对照组(加入等量PBS)、rhHMGB1 处理组(100 ng/mL)、普通肝素对照组(UFH10 U/mL)、rhHMGB1+ 普通肝素处理组(100 ng/mL rhHMGB1 + UFH 10 U/mL)。传代培养后的人脐静脉内皮细胞,通过MTT 法测定内皮细胞的存活率。Transwell 法测定内皮细胞通透性;免疫荧光法对Claudin-5 表达及分布进行测定;通过蛋白免疫印迹(Western blot) 法检测Claudin-5 蛋白表达。结果 用rhHMGB1(100 ng/mL) 处理内皮细胞后,与空白对照组比较细胞活力无明显变化(P>0.05);用rhHMGB1(100 ng/mL) 分别处理内皮细胞3 h、6 h 后,内皮细胞屏障通透性较空白对照组无明显变化(P>0.05);而经rhHMGB1 处理12 h、24 h 后,与空白对照组相比,内皮细胞屏障通透性显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而普通肝素和rhHMGB1 共同孵育内皮细胞12 h、24 h 后,其内皮细胞屏障通透性均低于rhHMGB1 处理组(P<0.05)。免疫荧光和Westernblot研究表明,rhHMGB1 处理内皮细胞24 h 后,细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 分布和表达降低;而经普通肝素和rhHMGB1 共同孵育后,细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 的表达提高,Claudin-5的荧光强度增强。结论 HMGB1 可介导内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 的分布异常和表达下降,以及增加内皮细胞屏障的通透性;普通肝素可改善HMGB 1 介导的内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 的表达和分布及内皮细胞屏障通透性。

吴蕾,栾正刚. 普通肝素对高迁移率族B1 介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5 下调的保护作用[J]. 中华急诊医学杂志, ,: 1237-1241.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2018.11.011