现在位置是: | 首 页 | >> |
关键字: |
[目的] 观察 microRNA-146a(miR-146a)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的影响,并探讨其机制。方法 将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞接种于6孔板,分别转染50nmol/L miR-146a拟似物(minic)和阴性对照,随后用1μg/ ml终浓度的LPS 刺激6 h,采用免疫荧光法观察核转录因子κB(nuclear factor-KappaB,NF-κB)p65 的核移位,ELISA检测培养上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)蛋白的表达,实时定量逆转录PCR(real time-quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中白介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinase,IRAK-1)mRNA、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor-associated factor 6,TRAF-6)mRNA和TNF-α mRNA的表达,蛋白质免疫印迹实验(Western bloting)检测细胞内 IRAK-1、TRAF-6、NF-κB p65蛋白的表达。应用SPSS17.0统计软件分析数据,数据以均数±标准差表示,两样本比较采用独立样本t检验。P<0.05为差异有统计学意义。结果 与对照组比较,倒置荧光显微镜下观察到转染组 NF-κB p65 胞浆中表达增多,胞核中减少,Western bloting 检测到NF-κB p65蛋白在胞浆中表达增加为(1.74±0.11)、胞核中表达下降为(0.56±0.12)(P<0.05);细胞 TNF-α mRNA 表达下降为(0.47±0.06)(P<0.05),上清液中 TNF-α 蛋白表达下降(616.60±42.28pg/ml比211.50±30.39pg/ml)(P<0.01);IRAK-1 mRNA 和 TRAF-6 mRNA 表达量无明显变化(P>0.05),而 IRAK-1 和 TRAF-6 蛋白表达水平分别下降为(0.73±0.05)(P<0.05)和(0.64±0.09)(P<0.05)。结论 miR-146a能够调控肺泡巨噬细胞炎症反应,其机制可能是转录后水平作用于 IRAK-1和TRAF-6 蛋白,阻断NF-κB的活化,发挥抗炎作用。
张建国,陈晓娟,丁成志,邵强,曾振国,刘芬,钱克俭. MicroRNA-146a调控肺泡巨噬细胞炎症反应的机制[J]. 中华急诊医学杂志, 2015,24(4): 413-415.