目的 探讨脂多糖(LPS) 刺激下NUFIP-1 介导核糖体自噬在树突细胞(DCs) 凋亡中的作用及意义。方法 将培养的树突细胞系DC2.4 分为空白对照组及LPS 刺激6、12、24、48、72 h组(n=5)，LPS 各亚组加入1 μg/mL LPS 培养相应时间。采用Western blot 检测各组细胞NUFIP-1 及自噬相关蛋白p62 和LC3B表达水平，激光共聚焦显微镜检测NUFIP-1 在细胞中的表达与定位及其分别与Lyso-tracker、LC3B 共定位情况。将载有沉默空载体NS 及沉默慢病毒载体NUFIP-1 siRNA 感染DC2.4 (n=3)，以1 μg/mL LPS 刺激24 h，应用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况，并采用Western blot检测凋亡相关蛋白包括胱天蛋白酶(cleaved-caspase-3) 和Bcl-2表达水平。多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，采用LSD-t 法进一步进行组间两两比较。以P<0.05 为差异有统计学意义。结果 Western blot 结果提示， LPS 刺激不同时间(6、12、24、48、72 h) 后DC2.4 中NUFIP-1 蛋白表达水平呈现先升高后下降趋势，其中LPS 24 h组NUFIP-1表达水平显著高于空白对照组[ 空白对照组：(0.6786 ± 0.0820) ；LPS 24 h组：(1.4830 ± 0.1170)，P<0.01]。同时，LPS 24 h组p62表达水平显著低于空白对照组[ 空白对照组：(0.9087 ± 0.1235) ；LPS 24 h组：(0.3113 ± 0.5571)，P<0.01]。LPS 24 h组LC3B-I 向LC3B- Ⅱ的转化显著高于空白对照组[ 空白对照组：(0.5542 ± 0.1248) ；LPS 24 h组：(2.5310 ± 0.3119)，P<0.01]。激光共聚焦显微镜观察显示，NUFIP-1 主要定位于细胞核及核周，LPS 刺激后其荧光强度于6 h至24 h呈时间依赖性增强，而刺激48、72 h明显减弱。同时，NUFIP-1 与Lyso-tracker 及LC3B 的共定位较空白对照组显著增强。采用慢病毒感染技术感染NUFIP-1 siRNA 可显著下调DC2.4 NUFIP-1表达水平，与空白对照组及空载体组比较分析，差异有统计学意义[ 空白对照组：(0.6627 ± 0.1707) ；空载体组：(0.6966 ± 0.1107) ；siRNA 组：(0.1428 ± 0.0296)，P<0.05]。流式细胞分析术显示，NUFIP-1siRNA 感染组在LPS 刺激后较空白对照LPS 24 h组及空载体LPS 24 h组DC2.4 凋亡率显著升高[ 空白对照LPS 24 h组：(47.91%±1.006%) ；空载体LPS 24 h组：(70.26% ± 1.011%) ；siRNA LPS 24h 组：(80.23% ± 2.094%)，P<0.01]。Western blot 分析进一步证实，NUFIP-1 siRNA 感染组相较空白对照组及空载体组在LPS 刺激下DC2.4 凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3表达显著增强[ 空白对照LPS 24 h组：(0.4748 ± 0.0876)；空载体LPS 24 h组：(0.2849 ± 0.0418)；siRNA LPS 24 h组：(0.9733± 0.0525)，P<0.01]，抗凋亡蛋白Bcl-2表达则明显下调[ 空白对照LPS 24 h组：(0.7810 ± 0.0490)；空载体LPS 24 h组：(0.8292 ± 0.0729) ；siRNA LPS 24 h组：(0.3957 ± 0.0838)，P<0.05]。 结论 LPS 刺激后DC2.4 中NUFIP-1 介导核糖体自噬明显活化，且对DC2.4 凋亡具有显著保护效应。

郑丽玉,姚人骐,董宁,吴瑶,姚咏明. 核糖体自噬对脂多糖诱导树突细胞凋亡的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2022,31(10): 1334-1340.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2022.10.006

基金项目：国家自然科学基金重点项目(82130062, 81730057)

关键词： NUFIP-1 核糖体自噬 脂多糖 脓毒症 免疫功能紊乱 细胞凋亡 树突细胞 免疫抑制