中华急诊医学杂志  2016, Vol. 25 Issue (7): 864-870
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潘赟, 钱进先, 崔妍, 张国兴, 陆士奇. 丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2016, 25(7): 864-870.
Pan Yun, Qian Jinxian, Cui Yan, Zhang Guoxing, Lu Shiqi. Protective effects of tanshinone ⅡA sodium sulfonate on ischemia-reperfusion induced myocardial injury in rats[J]. Chin J Emerg Med, 2016, 25(7): 864-870.
丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响
潘赟, 钱进先, 崔妍, 张国兴 , 陆士奇     
215006 江苏省苏州，苏州大学附属第一医院急诊科(潘赟、陆士奇)；
215006 江苏省苏州，南京医科大学附属苏州市立医院北区重症医学科(钱进先)；
130000 长春，吉林大学第一医院心内科(崔妍)；
215123 江苏省苏州，苏州大学独墅湖校区生理教研室(张国兴)；潘赟、钱进先为共同第一作者
收稿日期： 2016-01-23
基金项目： 国家自然科学基金(81270316)
通信作者： 陆士奇，Email: lushiqi2004@126.com；
张国兴，Email：zhangguoxing@suda.edu.cn
摘要： 目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(tanshinone ⅡA sodium sulfonate, TSS)对雄性(SD)大鼠心肌缺血-再灌注损伤(ischemia/reperfusion, I/R)的影响，并初步探讨其作用机制。 方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min，结扎的心肌组织颜色变灰标志着结扎成功，再灌注24 h建立缺血-再灌注模型，将存活的SD大鼠随机(随机数字法)分为对照组(Sham组，n=10)、缺血-再灌注组(I/R组,n=10)、TSS低剂量组(TSS-L组, n=10)、TSS中剂量组(TSS-M组,n=9)、TSS高剂量组(TSS-H组,n=9)。MAP心脏功能分析系统检测血流动力学指标，TTC染色法检测大鼠心肌梗死面积，Western blot法检测心肌Bcl-2、Bax、Caspase-3、Lc3B/Lc3A、Beclin-1及高迁移率蛋白B1(high-mobility group box1，HMGB1)的表达。多组间比较采用ANOVA分析，多组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 I/R组较Sham组心功能舒缩参数明显降低，TSS预处理使其显著升高(P<0.05)，但DAP、Pmin差异无统计学意义(P>0.05)。TSS预处理组心肌梗死百分比显著低于I/R组(P<0.05)。与Sham组相比，I/R组显著增加了Caspase-3表达(P<0.01)；TSS预处理组能够明显下调Caspase-3蛋白表达(P<0.01)。I/R组Bax表达亦明显升高(P<0.01)，TSS能够抑制Bax蛋白表达(P<0.01)。I/R组降低了Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.05)，不同剂量的TSS预处理均使Bcl-2表达水平升高(P<0.01)。I/R组Bcl-2/Bax较Sham组比值降低(P<0.05)；TSS预处理使其明显升高(P<0.05)。自噬相关蛋白Beclin-1与Lc3B/Lc3A有相似的变化趋势，I/R组Beclin-1蛋白及Lc3B/Lc3A水平低于Sham组(P<0.05)，TSS预处理能够上调Beclin-1表达与Lc3B/Lc3A比值(P<0.05)。与Sham组比较HMGB1表达明显增高(P<0.05)，TSS预处理组较I/R组减少了HMGB1的表达(P<0.01)。 结论 丹参酮ⅡA磺酸钠对SD大鼠心肌缺血-再灌注损伤具有保护作用，其机制与抑制细胞凋亡，激活细胞自噬有关。
关键词： 丹参酮ⅡA磺酸钠     大鼠     缺血-再灌注损伤     凋亡     自噬    
Protective effects of tanshinone ⅡA sodium sulfonate on ischemia-reperfusion induced myocardial injury in rats
Pan Yun, Qian Jinxian, Cui Yan, Zhang Guoxing , Lu Shiqi     
Emergency Department, The First Affiliated Hospital, Soochow University, Suzhou 215006, China(Pan Y，Lu SQ)；
Department of ICU Affiliated Suzhou Hospital of Nanjing Medical University,Suzhou 215006, China(Qian JX)；
Department of Cardiology, The First Hospital of Jilin University，Changchun 130000, China(Cui Y)；
Department of Physiology, Medical College of Soochow University, 215123, China(Zhang GX)
Abstract: Objective To observe the effects of Tanshinone ⅡA sodium sulfonate (TSS) on ischemia/reperfusion (I/R) induced cardiac injury in male (Sprague-Dawley, SD) and explore its mechanisms. Methods Rats were subjected to a 30 min coronary arterial occlusion followed by 24 hours reperfusion.The survival rats were randomly(random number) divided into sham group (Sham group, n=10), ischemia reperfusion group (I/R group, n=10), low dose of TSS group (TSS-L group, n=10), medium dose of TSS group (TSS-M group, n=9), high dose of TSS group (TSS-H group, n=9). A MAP heart function analysis system was used to measure hemodynamic variables, and TTC staining method was used to detect the myocardial infarct size. The levels of Bcl-2, Bax, Caspase-3, Lc3B/Lc3A, Beclin-1 and high mobility group box1 (HMGB1) were detected by western blot method. All data were analyzed by using One-way analysis of variance (ANOVA) (LSD-t test). Results Cardiac function in I/R group was lower than that in Sham group, and that was significantly improved by pretreated with TSS(P<0.05), but there were no significant differences in Pmin and DAP between Sham group and I/R group(P>0.05). The percentage of myocardial infarct size in TSS pretreatment group was significantly smaller than that in I/R group(P<0.05). Compared with Sham group, levels of Caspase-3 and Bax increased, and the Bcl-2 content was reduced obviously in I/R group(P<0.05). TSS pretreatment significantly down-regulated the levels of Caspase-3 and Bax protein(P<0.01). At the same time, the level of Bcl-2 was increased in all TSS pretreatment groups(P<0.01). Compared with Sham group, the ratio of Bcl-2/Bax in I/R group was lower (P<0.05), and that was elevated in TSS groups(P<0.05). The change of autophagy related protein beclin-1 and Lc3B/Lc3A was in similar trend, and the levels of beclin-1 and Lc3B/Lc3A in I/R group were lower than that in Sham group (P<0.05), and those were raised in TSS pretreatment groups (P<0.05). The level of HMGB1 in I/R group was higher than that in Sham group (P<0.05), and compared with I/R group,the level of HMGB1 significantly decreased in TSS pretreatment groups (P<0.01). Conclusions The tanshinone ⅡA sodium sulfonate can protect the myocardium from ischemia/reperfusion injury and the mechanism may be attributed to the inhibition of cell apoptosis and activation of cell autophagy.
Key words: Tanshinone ⅡA sodium sulfonate     Rats     Ischemia/reperfusion injury     Apoptosis     Autophagy    

丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA )是唇形科植物丹参的主要成分，几千年来在中国传统医学上被用于多种与微循环有关疾病的治疗[1]。在循环系统中，丹参酮ⅡA磺酸钠(TSS)可以减弱心肌细胞肥大，通过诱发冠状动脉扩张，减少心肌细胞损伤[2]。之前报道表明，在动物缺血-再灌注损伤模型中，TSS有改善心肌功能、减少梗死面积比例、抑制细胞凋亡等保护心肌作用[3, 4]。心肌缺血-再灌注损伤涉及多种作用机制，主要包括钙超载、活性氧过氧化(ROS)、NF-κB等，这些因素最终导致心肌死亡，心肌功能受损[5, 6, 7]。相反，心肌细胞死亡时激活自噬可以保护心肌损伤[8]。笔者之前的研究也表明心肌细胞缺血-再灌注损伤反应时，自噬标志物如Beclin-1和Lc3B/Lc3A表达增加[9]，自噬上调可以保护心肌免受缺血-再灌注损伤。由此推测TSS的心肌保护作用可能与抗凋亡及诱导自噬有关。

1 材料与方法 1.1 实验动物及试剂

10 周大的雄性SD大鼠，购自上海实验动物中心。丹参酮ⅡA磺酸钠由上海第一生化药业有限公司提供。抗Caspase-3抗体、抗Bax抗体、抗Lc3抗体、抗HMGB1抗体购自美国Abcam公司，抗Bcl-2抗体购自Immunoway公司，抗Beclin-1抗体、抗GAPDH抗体购自Santa Cruz公司，HRP标记的二抗购自美国Bioworld公司。

1.2 心肌缺血-再灌注模型

雄性SD大鼠腹腔内注射10%的水合氯醛(350 mg/kg)麻醉，于胸骨左旁3、4肋间开胸暴露心脏，剪开心包。Sham组(n=10)大鼠开胸，心肌穿过缝线，但未结扎；I/R组(n=10)大鼠结扎，但未注射丹参酮ⅡA磺酸钠；其余大鼠结扎冠状动脉左前降支中1/3，以结扎的心肌组织颜色变灰作为结扎成功的标志，结扎30 min后释放缝线再灌注24 h[10]。将存活的大鼠分为3组：(1)TSS-L组(n=10) 大鼠结扎，注射15 mg/kg丹参酮ⅡA磺酸钠；(2)TSS-M组(n=9) 大鼠结扎，注射30 mg/kg丹参酮ⅡA磺酸钠；(3)TSS-H组(n=9) 大鼠结扎，注射70 mg/kg丹参酮ⅡA磺酸钠。

1.3 心肌功能检测

心肌缺血-再灌注24 h后，用MAP心脏功能分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司)检测心脏血流动力学指标。分离出大鼠左侧股动脉和右侧颈动脉，分别置入聚苯乙烯PE-50导管。检测动脉收缩压、最大左室压力变化速度、左室舒张末压等反映心肌功能的血流动力学指标。

1.4 心肌梗死百分比计算

心功能检测之后，取出心脏，用1%的伊文氏蓝4 mL左右进行冠脉灌注，沿结扎点处取心脏组织横切面(1~2 mm厚)，放入装有PBS的培养皿中，加入适量TTC，室温下放置10 min后取出。心脏横切面中蓝色区域被伊文氏蓝染色，代表未受损心肌，红色区域代表心肌缺血区，缺血区中被TTC染成白色区域为心肌梗死区，梗死区与缺血区的比值为心肌梗死的百分比。

1.5 Western bolt分析

收集研碎的心肌组织，细胞裂解液裂解心肌获得蛋白匀浆，BCA法定量蛋白，蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Lc3B、Lc3A、Beclin-1及HMGB1等蛋白的表达。用ImagePro Plus6.0图像分析软件处理，以目的条带与内参GAPDH条带的灰度值比表示蛋白的相对含量。

1.6 统计学方法

采用SPSS18.0 软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差(x±s)表示，多组均数比较采用ANOVA分析，多组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果 2.1 丹参酮ⅡA磺酸钠改善缺血-再灌注损伤心肌的功能

SD大鼠再灌注24 h后，用MAP心脏功能分析系统检测心脏血流动力学指标。如表 1所示，与Sham组(83.8±2.9)mmHg相比，I/R组SAP显著下降(61.7±8.8)mmHg,差异具有统计学意义(t=3.824,P<0.05)；TSS-M组使SAP升高 。与Sham组比较(4943±142)，I/R组dp/dtmax(mmHg/s)(2 262±187,t=2.618,P<0.05)明显下降；TSS-L、TSS-M、TSS-H组dp/dtmax(mmHg/s)均有不同程度升高(3 265±120 vs.4 297±203 vs. 3 901±133,F=112.983,P<0.05)，与Sham组比较(4 479±155)，I/R组-dp/dtmax下降明显(2 047±161,t=-2.623,P<0.05)；TSS-L、TSS-M、TSS-H组-dp/dtmax显著升高(2 787±257 vs. 4010±176 vs. 3 859±189,F=32.375,P<0.05)。DAP、Pmin差异无统计学意义(P>0.05)。结果提示，TSS能改善大鼠缺血-再灌注心肌的舒缩功能。

表 1 参酮ⅡA磺酸钠对大鼠缺血-再灌注模型心肌的作用效果(x±s) Table 1 Effect of TSS on myocardial ischemia reperfusion model in rats (x±s)
指标假手术组 缺血-再灌注组低剂量组 中剂量组 高剂量组
SAP(mmHg)83.8±2.961.7±8.8a68.9±8.489.6±3.3b77.1±5.7
DAP(mmHg)61.1±3.047.2±6.450.8±7.366.2±3.858.7±4.1
Pmax(mmHg)98.2±2.568.9±3.9a84.8±4.8b93.1±1.2b93.3±1.8b
Pmin(mmHg)2.8±0.98.0±3.56.8±1.37.8±2.14.1±1.2
Pmean(mmHg)42.9±1.830.9±7.2a42.4±3.0b49.6±1.6b44.5±2.0b
LVEDP(mmHg)15.4±2.343.8±5.9a35.4±5.622.8±3.8b22.2±4.9b
+dp/dtmax(mmHg/s)4943±1422262±187a3265±120b4297±203b3901±133b
-dp/dtmax(mmHg/s)4479±1552047±161a2787±257b4010±176b3859±189b
 注：1 mmHg=0.133 kPa；SAP (收缩压)，DAP (舒张压) Pmax (左室最大发展压)，Pmin (左室最小发展压)，Pmean (平均左室发展压)，LVEDP (左室舒张末压)，+dp/dtmax (左室压力上升的最大变化率)，-dp/dtmax (左室压力下降的最大变化率)。与Sham组比较，aP<0.05；与I/R组比较，bP<0.05
表选项
2.2 丹参酮ⅡA磺酸钠降低心肌梗死面积百分比

如图 1所示，与I/R组(37.47±2.36)%比较，TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组的心肌梗死面积百分比分别为(15.88±3.03)%、(8.22±1.47)%、(10.44±2.54)%，差异具有统计学意义(F=428.684，P<0.05)。提示TSS可以有效的降低心肌梗死面积百分比，减少心肌梗死面积。

A：大鼠左心室缺血-再灌注心肌横切面；B:心肌梗死面积百分比,即梗死区与缺血区的比值;与Sham组比较，aP<0.05；与I/R组比较，bP<0.05 图 1 各组大鼠心肌梗死面积百分比 Fig. 1 Percentage of myocardial infarction area in each group
图选项
2.3 丹参酮ⅡA磺酸钠抑制缺血-再灌注心肌促凋亡蛋白表达，增加抗凋亡蛋白表达

用Western bolt法分析TSS对凋亡蛋白表达的影响，结果显示与Sham组(0.49±0.21)相比，I/R组显著增加了Caspase-3表达，差异有统计学 意义(2.03±1.02，t=-5.091,P<0.01)；TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组Caspase-3表达为(1.37±1.02 vs. 0.56±0.17 vs. 0.57±0.39,F=16.113，P<0.01),低于I/R组。Sham组Bcl-2蛋白表达量为(2.90±0.80),I/R组下调Bcl-2表达(0.35±0.22，t=0.946,P<0.05)TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组能不同程度的促进Bcl-2表达(1.27±0.59 vs. 2.25±0.55 vs. 2.30±0.92，F=18.297，P<0.05)。Sham组Bax蛋白表达(0.35±0.17)，I/R组能使Bax表达增加(1.51±0.58，t=-6.521,P<0.01)；TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组下调Bax表达为(1.00±0.29 vs. 0.55±0.25 vs. 0.68±0.46，F=12.823,P<0.01)。由Bcl-2与Bax蛋白表达计算得出Bcl-2/Bax比值，与Sham组(8.61±3.12)相比，I/R组Bcl-2/Bax比值降低(0.24±0.15,t=37.253，P<0.05)；TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组预处理使其不同程度升高，差异具有统计学意义(0.99±0.47 vs. 4.52±1.77 vs. 4.27±2.88,F=18.297，P<0.05)。如图 2所示，TSS-M组促进抗凋亡蛋白与抑制促凋亡蛋白作用大于TSS-L，但继续升高至TSS-H时，该效应并未继续增强，提示TSS抗凋亡作用在一定范围内呈剂量正相关关系。

A:各组Bcl-2，Bax，Caspase-3及GAPDH的显影图像;B:Caspase-3与内参蛋白GAPDH的比值;C:Bax与GAPDH的比值;D:Bcl-2与GAPDH的比值;E:Bcl-2与Bax的比值;与Sham组比较，aP<0.05；与I/R组比较，bP<0.05 图 2 不同剂量的TSS对各组凋亡蛋白表达的影响 Fig. 2 Effect of different doses of TSS on the expression of apoptosis protein in each group
图选项
2.4 丹参酮ⅡA磺酸钠在大鼠缺血-再灌注模型中上调Beclin-1蛋白，增加Lc3B/Lc3A比值

Sham组Lc3B/Lc3A比值为(1.46±0.48)，I/R组能够降低Lc3B/Lc3A比值(0.54±0.20,t=5.785,P<0.05)；TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组Lc3B/Lc3A比值分别为(0.71±0.25 vs. 1.04±0.38 vs. 0.90±0.31,F=11.475，P<0.01)。与Sham组Beclin-1蛋白水平比较(2.29±0.89)，I/R组Beclin-1蛋白表达量降低(0.50±0.37,t=4.886,P<0.05)；TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组Beclin-1的表达均高于I/R组(1.67±1.03 vs. 2.00±0.94 vs. 2.25±1.02,F=48.809，P<0.05)。见图 3。

A：各组蛋白Beclin-1和LC3B/LC3A蛋白印迹图像；B：Beclin-1与GAPDH的比值；C：Lc2B与Lc3A的比值；与Sham组比较，aP<0.05；与I/R组比较，bP<0.05 图 3 不同剂量的TSS对各组自噬相关蛋白表达的影响 Fig. 3 Effects of different doses of TSS on the expression of autophagy related proteins in each group
图选项
2.5 丹参酮ⅡA磺酸钠抑制大鼠缺血-再灌注模型中心肌HMGB1的表达

Sham组HMGB1表达为(1.20±0.26)，I/R组使其显著增加(0.19±0.09,t=8.591,P<0.05)；TSS-L组、TSS-M组、TSS-H组HMGB1蛋白表达分别为(0.56±0.10 vs. 0.77±0.09 vs. 0.80±0.27,F=25.338，P<0.01)。见图 4。

A：HMGB1的蛋白印迹图像；B：HMGB1与GAPDH的比值；与Sham组比较，aP<0.05；与I/R组比较，bP<0.05 图 4 不同剂量的TSS对HMGB1表达的影响 Fig. 4 Effect of different doses of TSS on the expression of HMGB1
图选项
3 讨论

左冠状动脉阻断引起急性心肌梗死时，迅速的血流再灌注能有效恢复血液供应，减少心肌梗死面积，同时再灌注本身亦可引起额外的心肌细胞凋亡，加重心肌细胞损伤，称为缺血-再灌注损伤[11]。目前研究发现丹参酮ⅡA磺酸钠通过抑制细胞凋亡级联反应，诱导自噬途径发生来提高心肌功能，减少心肌损伤。

对于心肌缺血-再灌注损伤最主要的治疗措施是恢复心肌功能，避免其他脏器衰竭。因此，能否增强心肌细胞功能，成为临床评估心肌梗死患者的治疗效果的主要手段。本研究数据显示丹参酮ⅡA磺酸钠可以增加心脏SAP(左室收缩压)、Pmax(左室最大发展压)、±dp/dtmax(左室压力最大上升/下降变化率)等代表心脏收缩、舒张功能的指标,表明丹参酮ⅡA磺酸钠可以显著减少心肌缺血-再灌注损伤，保护心肌功能。

缺血-再灌注损伤与细胞凋亡途径的激活高度相关，因此人们也在探索能够抑制凋亡信号激活的各种措施。之前报道显示TSS可以通过抑制JNK激活抵抗过氧化导致的细胞凋亡[12]、通过Akt和ERK1/2磷酸化抑制H9c2心肌细胞的凋亡[4]，以及通过激活PI3K/Akt/FOXO3A/Bim途径，起到保护心肌的作用[13]。研究学者认为细胞在受到诱导凋亡时，Bcl-2和Bax基因在细胞存活和死亡过程中起到关键作用[14]。此外，Caspase-3在细胞凋亡的终末途径中也有重要作用,降低Caspase-3的活性，具有抗凋亡的作用[15]。本实验结果表明丹TSS可以抑制促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达，增强抗凋亡蛋白Bcl-2表达，表明丹参酮ⅡA磺酸钠可以通过调节心肌细胞促凋亡和抗凋亡信号通路平衡，保护心肌功能。

细胞受到损害时，自噬途径被激活，可以满足修复和解毒功能、提供能量或者传递代谢产物。在心肌缺血-再灌注损伤时，自噬信号通路的激活可以起到心肌保护的作用[16]。在猪体内急性心梗死模型中，与自噬有关的信号上调，增加了对心肌缺血-再灌注损伤的抵抗[17]，起到缺血-再灌注损伤的修复作用。笔者之前的研究也表明心肌缺血再灌损伤时能激活自噬[10]。虽然一些研究表明，丹参酮ⅡA磺酸钠通过多种机制减少缺血-再灌注所致的心肌损伤，但是是否通过自噬途径仍不清楚。本研究表明丹参酮ⅡA磺酸钠可以通过上调自噬蛋白，Beclin-1和Lc3B/Lc3A的比值，保护心肌细胞。通过自噬的自我修复程序降低细胞损伤，这也为丹参酮ⅡA磺酸钠治疗心肌缺血-再灌注损伤提供了新的依据。

HMGB1是由坏死细胞、单核细胞、活化的巨噬细胞和凋亡细胞释放的非染色体蛋白质，能够维持核小体稳定和调节基因转录[18]。同时，HMGB1可以显著增加新生细胞凋亡和降低细胞活性[19]，HMGB1-TLR4途径通过调节心肌细胞凋亡导致心肌细胞缺血-再灌注损伤[20]。此外，尚有HMGB1与组织自噬有关的报道[21]。丹参酮ⅡA能减少大鼠脑I/R损伤中HMGB1表达[22]，但是TSS对于心肌HMGB1的作用还鲜有报道，本研究提出TSS在心肌组织的缺血-再灌注反应中，可以通过抑制HMGB1表达水平，从而减少心肌细胞凋亡，起到保护心肌作用。

本研究结果显示丹参酮ⅡA磺酸钠通过减少细胞凋亡，诱发自噬信号通路等途径，起到对心肌缺血-再灌注损伤的保护作用。

参考文献
[1] Kai G, Hui X, Zhou C, et al. Metabolic engineering tanshinone biosynthetic pathway in Salvia miltiorrhiza, hairy root cultures[J]. Metab Eng, 2011, 13(3):319-327.DOI:10.1016/j.ymben.2011.02.003.
[2] Wu GB, Zhou EX, Qing DX. Tanshinone II A, elicited vasodilation in rat coronary arteriole: Roles of nitric oxide and potassium channels[J]. Eur J Pharmacol, 2009, 617(1/3):102-107.DOI:10.1016/j.ejphar.2009.06.046.
[3] Wei B, Li WW, Ji J, et al. The cardioprotective effect of sodium tanshinone ⅡA sulfonate and the optimizing of therapeutic time window in myocardial ischemia/reperfusion injury in rats[J]. Atherosclersis, 2014, 235(2):318-327.DOI: 10.1016/J.atherosclersis.2014.05.924.
[4] Ying Y, Yue G, Duan J, et al. Cardioprotective effect of Danshensu against myocardial ischemia/reperfusion injury and inhibits apoptosis of H9c2 cardiomyocytes via, Akt and ERK1/2 phosphorylation[J]. Eur J Pharmacol, 2013, 699(1/3):219-226. DOI:10.1016/j.ejphar.2012.11.005.
[5] Kwak W, Ha YS, Soni N, et al. Apoptosis imaging studies in various animal models using radio-iodinated peptide[J]. Apoptosis, 2015, 20(1):110-121.DOI:10.1007/s10495-014-1059-z.
[6] Nakagawa T, Shimizu S, Watanabe T, et al. Cyclophilin D-dependent mitochondrial permeability transition regulates some necrotic but not apoptotic cell death[J]. Nature, 2005, 434(7033):652-658.DOI:1038/nature03317.
[7] 张波, 王志农, 王军,等. NF-κB在早期心肌缺血-再灌流损伤中的作用[J]. 中华急诊医学杂志, 2005, 14(5):384-387.DOI:10.3760/j.issn.1671-0282.2005.05.008.Zhang B, Wang ZN, Wang J, et al. The role of nuclear factor- B at the early phase of myocardial ischemia-reperfusion injury [J]. Chin J Emerg Med, 2005, 14(5):384-387.
[8] Depre C, Vatner SF. Cardioprotection in stunned and hibernating myocardium[J]. Heart Failure Reviews, 2007, 12(12):307-317.
[9] Chen C, Hu LX, Dong T, et al. Apoptosis and autophagy contribute to gender difference in cardiac ischemia-reperfusion induced injury in rats[J]. Life Sci, 2013, 93(7):265-270.DOI:10.1007/s10741-007-9040-3.
[10] Zhang GX, Kimura S K, Obata K, et al. Inhibition of cytochrome c release by 10-N-nonyl acridine orange, a cardiolipin-specific dye, during myocardial ischemia-reperfusion in the rat[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2010, 298(2):433-439.DOI:10.1152/ajphear.00938.2009.
[11] Yellon DM, Hausenloy DJ. Myocardial reperfusion injury [J]. N Engl J Med, 2007, 357(11):1121-35.DOI: 10.1172/JCI113364.
[12] Yang R, Liu A, Ma X, et al. Sodium tanshinone ⅡA sulfonate protects cardiomyocytes against oxidative stress-mediated apoptosis through inhibiting JNK activation[J]. J Cardiovasc Pharm, 2008, 51(4):396-401.DOI:10.1097/FJC.0b013e318671439.
[13] Zhang MQ, Zheng YL, Chen H, et al. Sodium tanshinone ⅡA sulfonate protects rat myocardium against ischemia-reperfusion injury via activation of PI3K/Akt/FOXO3A/Bim pathway[J]. Acta Pharmacol Sin, 2013, 34(11):1386-1396.DOI:10.1038aps.2013.91.
[14] Yan P, Chen SQ, Li ZP, et al. Effect of exogenous phosphocreatine on cardiomycytic apoptosis and expression of Bcl-2 and Bax after cardiopulmonary resuscitation in rats[J]. Word J Emerg Med, 2011, 2(4):291-295.DOI:10.5947/wjem.j.1920-8642.2011.04.009.
[15] 胡志伟, 赵静, 张凯伦,等. 二氮嗪对大鼠心肌缺血-再灌流损伤细胞凋亡的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2005, 14(12):1000-1003.DOI:10.3760/j.issn.1671-0282.2005.12.009.Hu ZW, Zhao J, Zhang KL, et al. Effect of diazoxide on apoptosis induced by mycardial ischemia/reperfusion injury in rats[J] Chin J Emerg Med, 2005, 14(12):1000-1003.
[16] Decker RS, Wildenthal K. Lysosomal alterations in hypoxic and reoxygenated hearts. I. Ultrastructural and cytochemical changes[J]. Am J Pathol, 1980, 98(2):425-444.
[17] Przyklenk K, Undyala VV, Wider J, et al. Acute induction of autophagy as a novel strategy for cardioprotection: getting to the heart of the matter[J]. Autophagy, 2011, 7(4):432-433.DOI: 10.4161/auto.7.4.14395.
[18] Yang H, Antoine DJ, Andersson U,et al. The many faces of HMGB1: molecular structure-functional activity in inflammation, apoptosis, and chemotaxis[J]. J Leukoc Biol, 2013, 93(6):865-873.DOI:10.1189/jlb.1212662.
[19] Hu X, Cui B, Zhou X, et al. Ethyl pyruvate reduces myocardial ischemia and reperfusion injury by inhibiting high mobility group box 1 protein in rats[J]. Eur J Pharmacol, 2010, 638(1/3):84-89.DOI:10.1016/j.ejphar.2010.03.059.
[20] Ding HS, Yang J, Chen P, et al. The HMGB1-TLR4 axis contributes to myocardial ischemia/reperfusion injury via regulation of cardiomyocyte apoptosis[J]. Gene, 2013, 527(1):389-393.DOI:10.1016/j.gene.2013.05.041.
[21] Sun X, Tang D. HMGB1-dependent and -independent autophagy[J]. Autophagy, 2014, 10(10):1873-1876.DOI:10.416/auto.32184.
[22] 张美齐, 翟昌林, 涂建锋,等. 丹参酮ⅡA对脑缺血-再灌注损伤大鼠高迁移率族蛋白1表达的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2012, 21(6):626-630.DOI:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2012.06.016.Zhang MQ, Zhai CL, Tu JF, et al. Influence of tanshinone II A on the expression of HMGB1 in rats with cerebral ischemia reperfusion injury[J] Chin J Emerg Med, 2012, 21(6):626-630.